Суюк хроматография аркылуу сандык анализдин принциптери жана методдору

Суюк хроматографиянын бөлүү механизми аралашмадагы компоненттердин эки фаза үчүн жакындыгынын айырмасына негизделген.

Ар кандай стационардык фазалары боюнча суюк хроматография суюк-катуу хроматография, суюк-суюк хроматография жана байланыш фазалык хроматография болуп бөлүнөт.Көбүрөөк колдонулганы суюк-катуу хроматография, толтургуч катары кремнезем жана матрица катары микросилика менен байланышкан фазалык хроматография.

Стационардык фаза формасы боюнча суюк хроматография колонна хроматографиясы, кагаз хроматографиясы жана жука катмар хроматографиясы болуп бөлүнөт.Адсорбциялык сыйымдуулугу боюнча ал адсорбциялык хроматография, бөлүү хроматографиясы, ион алмашуу хроматографиясы жана гель өтүү хроматографиясы болуп бөлүнөт.

Акыркы жылдарда суюктук колоннасынын хроматография системасына жогорку басымдагы суюктуктун агымы системасы кошулду, бул бөлүү эффектин жакшыртуу үчүн жогорку басымдын астында мобилдик фазанын тез агымын камсыз кылуу үчүн, ошондуктан жогорку эффективдүү (жогорку басым деп да белгилүү) суюк хроматография пайда болду.

БӨЛҮМ
Суюк хроматографиянын сандык анализинин 01 принциби

Стандарт катары сапаттык, таза заттардын негизинде санды аныктоо керек;

Суюк хроматографияны сандык аныктоо салыштырмалуу сандык ыкма: башкача айтканда, аралашмадагы анализденүүчү заттын көлөмү таза стандарттык үлгүнүн белгилүү өлчөмүнөн бааланат.

БӨЛҮМ
02 Суюк хроматография аркылуу сандык аныктоонун негизи

Ченелген компоненттин суммасы (W) жооп маанисине (A) пропорционалдуу (чоку бийиктик же чоку аянты), W=f×A.

Сандык оңдоо коэффициенти (f): Бул сандык эсептөө формуласынын пропорционалдык константасы, ал эми анын физикалык мааниси бирдик жооптун мааниси (чоку аянты) менен көрсөтүлгөн өлчөнгөн компоненттин суммасы болуп саналат.

Сандык оңдоо коэффициентин стандарттык үлгүнүн белгилүү көлөмүнөн жана анын жооп маанисинен алууга болот.

Белгисиз компоненттин жооп маанисин өлчөп, компоненттин суммасын сандык оңдоо коэффициенти менен алууга болот.

БӨЛҮМ
03 Сандык анализдеги жалпы терминдер

Үлгү (үлгү): хроматографиялык анализ үчүн талдоочу затты камтыган эритме.Стандарттык жана белгисиз үлгүлөргө бөлүнөт.

Стандарт: Белгилүү концентрациясы бар таза продукт.Белгисиз үлгү (белгисиз): концентрациясы текшериле турган аралашма.

Үлгүнүн салмагы: Сыналуучу үлгүнүн баштапкы таразасы.

Суюлтуу: Белгисиз үлгүнүн суюлтуу коэффициенти.

Компонент: сандык жактан анализделе турган хроматографиялык чоку, башкача айтканда, мазмуну белгисиз аналитик.

Компоненттин өлчөмү (суммасы): сыналуучу заттын курамы (же концентрациясы).

Бүтүндүк : Компьютер менен хроматографиялык чокунун чокусунун аянтын өлчөөнүн эсептөө процесси.

Калибрлөө ийри сызыгы: аналитиктин белгисиз курамын аныктоо үчүн колдонулган стандарттык заттын белгилүү көлөмүнөн түзүлгөн, компоненттин мазмунунун жооп маанисине каршы сызыктуу ийри сызыгы.

БӨЛҮМ
04 Суюктук хроматографиясынын сандык анализи

1. Сандык анализ үчүн ылайыктуу хроматографиялык ыкманы тандаңыз:

l Табылган компоненттин чокусун ырастаңыз жана 1,5тен жогору резолюцияга (R) жетиңиз

l Сыналган компоненттердин хроматографиялык чокуларынын консистенциясын (тазалыгын) аныктоо

l методдун аныктоо чегин жана сандык чегин аныктоо;сезгичтик жана сызыктуу диапазон

2. Ар кандай концентрациядагы стандарттык үлгүлөр менен калибрлөө ийри сызыгын түзүңүз

3. Сандык ыкмалардын тактыгын жана тактыгын текшерүү

4. Үлгүлөрдү чогултууну, маалыматтарды иштетүүнү жана отчеттун натыйжаларын ишке ашыруу үчүн тиешелүү хроматографияны башкаруу программасын колдонуңуз

БӨЛҮМ
05 Сандык чокуларды аныктоо (сапаттык)

Сандык аныктоо үчүн ар бир хроматографиялык чокуну сапаттык жактан аныктаңыз

Биринчиден, стандарттык үлгүнү сандык аныкталуучу хроматографиялык пиктин кармоо убактысын (Rt) аныктоо үчүн колдонуңуз.Сактоо убактысын салыштырып, белгисиз үлгүдөгү ар бир хроматографиялык чокуга туура келген компонентти табыңыз.Хроматографиялык сапаттык ыкма стандарттык үлгү менен кармоо убактысын салыштыруу болуп саналат.Критерий жетишсизкошумча тастыктоо (сапаттык)

1. Стандарттык кошуу ыкмасы

2. Ошол эле учурда башка ыкмаларды колдонуңуз: башка хроматографиялык ыкмаларды (механизмди өзгөртүү, мисалы: ар кандай хроматографиялык мамычаларды колдонуу), башка детекторлор (PDA: спектрди салыштыруу, спектр китепканасын издөө; MS: массалык спектр анализи, спектр китепканасын издөө)

3. Башка инструменттер жана методдор

БӨЛҮМ
06 Сандык чоку ырааттуулугун ырастоо

Хроматографиялык эң жогорку консистенцияны (тазалык) ырастоо

Ар бир хроматографиялык чокусунун астында бир гана өлчөнгөн компонент бар экенине ынаныңыз

Кошулуп чыгуучу заттардын (булгандардын) кийлигишүүсүн текшерүү

Хроматографиялык чоку ырааттуулукту (тазалык) тастыктоо ыкмалары

Фотодиоддук матрицалык (PDA) детекторлор менен спектрограммаларды салыштыруу

Тазалыктын чокусун аныктоо

2996 Тазалык бурч теориясы

07-БӨЛҮМде кеңири колдонулган сандык методдор

Стандарттык ийри сызык ыкмасы, тышкы стандарттык ыкма жана ички стандарттык ыкма болуп бөлүнөт:

1. Тышкы стандарттык метод: көбүнчө суюк хроматографияда колдонулат

Белгилүү концентрациялардын стандарттык үлгүлөрүнүн сериясы стандарттык үлгүлөр катары сыналуучу кошулмалардын таза үлгүлөрүн колдонуу менен даярдалган.анын жооп маанисине чейин колоннага сайылган (чоку аянты).
Белгилүү бир диапазондо стандарттык үлгүнүн концентрациясы менен жооп маанисинин ортосунда жакшы сызыктуу байланыш бар, атап айтканда W= f×A жана стандарттуу ийри сызык түзүлөт.

Дал ошол эле эксперименттик шарттарда өлчөнө турган компоненттин жооп маанисин алуу үчүн белгисиз үлгүнү сайыңыз.Белгилүү f коэффициентине ылайык, өлчөнө турган компоненттин концентрациясын алууга болот.

Тышкы стандарттык ыкманын артыкчылыктары:жөнөкөй операция жана эсептөө, бул көп колдонулган сандык ыкма;ар бир компонентти аныктоо жана элюциялоонун кереги жок;стандарттык үлгү талап кылынат;стандарттык үлгү менен белгисиз үлгүнүн өлчөө шарттары ырааттуу болушу керек;инъекциянын көлөмү так болушу керек.

Тышкы стандарттык методдун кемчиликтери:Эксперименттик шарттардын жогору болушу талап кылынат, мисалы, детектордун сезгичтиги, агымдын ылдамдыгы жана мобилдик фазанын курамын өзгөртүүгө болбойт;ар бир инъекциянын көлөмү жакшы кайталанууга ээ болушу керек.

2. Ички стандарттык метод: так, бирок түйшүктүү, көбүнчө стандарттык методдордо колдонулат

Аралаш эталон жасоо үчүн стандартка ички эталондун белгилүү өлчөмү кошулат жана белгилүү концентрациядагы жумушчу эталондорунун сериясы даярдалат.Аралаш эталондогу стандарттын ички эталонго молярдык катышы өзгөрүүсүз калат.Хроматографиялык колонкага сайып, жооп мааниси катары (стандарттык үлгүнүн чокусунун аянты/ички стандарттык үлгүнүн чокусунун аянты) алыңыз.Жооптун мааниси менен жумушчу стандарттын концентрациясынын ортосундагы сызыктуу байланышка ылайык, атап айтканда W= f×A , стандарттуу ийри сызык түзүлөт.

Белгилүү ички стандарттын көлөмү белгисиз үлгүгө кошулат жана өлчөнө турган компоненттин жооп маанисин алуу үчүн мамычага сайылат.Белгилүү f коэффициентине ылайык, өлчөнө турган компоненттин концентрациясын алууга болот.

Ички стандарттык методдун мүнөздөмөлөрү:Операция учурунда үлгү менен ички эталон аралаштырылып, хроматографиялык колонкага куюлат, андыктан аралаш эритмедеги ченелген компоненттин өлчөмүнүн ички эталонго болгон катышы туруктуу болсо, үлгү көлөмү өзгөрөт. сандык натыйжаларга таасирин тийгизбейт..Ички стандарттык ыкма үлгү көлөмүнүн, жада калса мобилдик фазанын жана детектордун таасирин жокко чыгарат, ошондуктан ал тышкы стандарттык методго караганда так.

БӨЛҮМ
08 Сандык анализдин натыйжаларына таасир этүүчү факторлор

Начар тактык себеп болушу мүмкүн:

Пик аянтынын туура эмес интеграциясы, үлгүнү даярдоо учурунда киргизилген үлгүнүн бузулушу же аралашмалар, үлгү флакон жабылбаган, үлгү же эриткичтин волатилизациясы, үлгүнү туура эмес даярдоо, үлгүлөрдү инъекциялоо көйгөйлөрү, туура эмес ички стандарттык даярдоо

Начар тактыктын мүмкүн болгон себептери:

Туура эмес чоку интеграциясы, инъекция же инжектор көйгөйлөрү, үлгүнүн бузулушу же үлгү даярдоо учурунда киргизилген аралашмалар, хроматографиялык көйгөйлөр, детектордун деградацияланган реакциясы