Суюк хроматография ар бир компоненттин курамын жана чийки заттагы, аралык продуктылардагы, препараттардагы жана таңгактоочу материалдардын курамын текшерүүнүн негизги ыкмасы, бирок көптөгөн заттарда таяна турган стандарттык методдор жок, ошондуктан жаңы ыкмаларды иштеп чыгуу сөзсүз болот. Суюк фазалык ыкмаларды иштеп чыгууда хроматографиялык колонна суюк хроматографиянын өзөгү болуп саналат, ошондуктан ылайыктуу хроматографиялык колонканы кантип тандоо өтө маанилүү. Бул макалада автор суюк хроматография мамычасын үч аспектиден кантип тандоону түшүндүрөт: жалпы идеялар, ойлор жана колдонуу чөйрөсү.
A. Суюк хроматография колонналарын тандоо боюнча жалпы идеялар
1. Талдануучу заттын физикалык жана химиялык касиеттерин баалаңыз: химиялык түзүлүшү, эригичтиги, туруктуулугу (мисалы, кычкылдануу/кичирейтүү/гидролиздештирүү оңойбу), кычкылдуулугу жана щелочтуулугу ж.б., өзгөчө химиялык түзүлүш ачкычы болуп саналат касиеттерин аныктоочу фактор, мисалы, конъюгацияланган топ күчтүү ультра кызгылт көк сиңирүүгө жана күчтүү флуоресценцияга ээ;
2. Талдоо максатын аныктоо: жогорку бөлүү, жогорку мамычанын натыйжалуулугу, кыска талдоо убактысы, жогорку сезгичтик, жогорку басымга каршылык, узун мамычанын иштөө мөөнөтү, арзан баада ж.б.у.с.;
- Ылайыктуу хроматографиялык тилкени тандаңыз: хроматографиялык толтургучтун курамын, физикалык жана химиялык касиеттерин түшүнүңүз, мисалы, бөлүкчөлөрдүн өлчөмү, тешикчелердин өлчөмү, температурага чыдамдуулук, рН толеранттуулугу, анализденүүчү заттын адсорбциясы ж.б.
- Суюк хроматография колонналарын тандоодо эске алуулар
Бул бөлүмдө хроматография колоннасынын физикалык жана химиялык касиеттеринин көз карашынан хроматография колоннасын тандоодо эске алынуучу факторлор талкууланат. 2.1 Толтуруучу матрицасы
2.1.1 Силикагель матрицасы Көпчүлүк суюк хроматография колонналарынын толтуруучу матрицасы кремний гели болуп саналат. Толтургучтун бул түрү жогорку тазалыкка, арзан баага, жогорку механикалык күчкө ээ жана топторду өзгөртүүгө оңой (мисалы, фенил байланышы, аминобайланыш, циано байланышы ж. Силикагель матрицалык толтургучтардын көбүнүн рН диапазону 2ден 8ге чейин, бирок атайын модификацияланган силикагель менен байланышкан фазалардын рН диапазону 1,5тен 10го чейин кенен болушу мүмкүн, ошондой эле рНнын төмөн деңгээлинде туруктуу болгон атайын модификацияланган силикагель менен байланышкан фазалар да бар. мисалы, Agilent ZORBAX RRHD stablebond-C18, рН 1ден 8ге чейин туруктуу; силикагель матрицанын жогорку температура чеги адатта 60 ℃ болуп саналат, ал эми кээ бир хроматография мамычалар жогорку рН 40 ℃ температурага чыдай алат.
2.1.2 Полимердик матрица Полимердик толтургучтар көбүнчө полистирол-дивинилбензол же полиметакрилат. Алардын артыкчылыктары рНнын кеңири диапазонуна туруштук бере алат – алар 1ден 14кө чейинки диапазондо колдонулушу мүмкүн жана алар жогорку температурага туруктуураак (80 °Cден жогору болушу мүмкүн). Кремний диоксидинин негизиндеги C18 толтургучтары менен салыштырганда, толтургучтун бул түрү күчтүүрөөк гидрофобдукка ээ жана макропороздуу полимер протеин сыяктуу үлгүлөрдү бөлүүдө абдан натыйжалуу. Анын кемчиликтери колонканын эффективдүүлүгү төмөн жана механикалык бекемдиги кремнеземдин негизиндеги толтургучтарга караганда начарыраак. 2.2 Бөлүкчөлөрдүн формасы
Көпчүлүк заманбап HPLC толтургучтары тоголок бөлүкчөлөр, бирок кээде алар туура эмес бөлүкчөлөр. Тоголок бөлүкчөлөр мамычанын төмөнкү басымын, мамычанын эффективдүүлүгүн, туруктуулугун жана узак өмүрүн камсыздай алат; жогорку илешкектүү мобилдик фазаларды колдонууда (мисалы, фосфор кислотасы) же үлгү эритмеси илешкек болгондо, туура эмес бөлүкчөлөр чоңураак спецификалык беттик аянтка ээ, бул эки фазанын толук аракетине көбүрөөк шарт түзөт жана баасы салыштырмалуу төмөн. 2.3 Бөлүкчөлөрдүн өлчөмү
Бөлүкчөлөрдүн өлчөмү канчалык аз болсо, мамычанын эффективдүүлүгү ошончолук жогору жана бөлүнүү ошончолук жогору, бирок жогорку басымга каршылык ошончолук начар болот. Эң көп колдонулган мамыча 5 мкм бөлүкчөлөрдүн өлчөмү мамыча болуп саналат; эгерде бөлүү талабы жогору болсо, 1,5-3 мкм толтургучту тандап алса болот, бул кээ бир татаал матрица жана көп компоненттүү үлгүлөрдү бөлүү маселесин чечүүгө ыңгайлуу. UPLC 1,5 мкм толтургучтарды колдоно алат; 10 мкм же андан чоңураак бөлүкчөлөрдүн өлчөмүн толтургучтар көбүнчө жарым даярдоочу же даярдоочу мамычалар үчүн колдонулат. 2.4 Көмүртектин курамы
Көмүртектин мазмуну силикагелдин бетиндеги байланышкан фазанын үлүшүн билдирет, ал белгилүү бир беттик аянтка жана байланышкан фазалык камтууга байланыштуу. Жогорку көмүртек мазмуну жогорку мамычанын кубаттуулугун жана жогорку токтомду камсыз кылат жана көп учурда жогорку бөлүүнү талап кылган татаал үлгүлөр үчүн колдонулат, бирок эки фазанын ортосундагы узак өз ара аракеттенүү убактысына байланыштуу, талдоо убактысы узун; аз көмүртектүү хроматографиялык колонналар кыскараак талдоо убактысына ээ жана ар кандай тандалмачылыктарды көрсөтө алат жана көбүнчө тез анализди талап кылган жөнөкөй үлгүлөр жана жогорку суу фазасынын шарттарын талап кылган үлгүлөр үчүн колдонулат. Жалпысынан, C18 көмүртек мазмуну 7% дан 19% га чейин. 2.5 Тешикчелердин өлчөмү жана беттин өзгөчө аянты
HPLC адсорбциялык каражаттар тешиктүү бөлүкчөлөр болуп саналат жана өз ара аракеттенүүлөрдүн көбү тешикчелерде болот. Демек, молекулалар адсорбцияланып, бөлүнүш үчүн тешикчелерге кириши керек.
Тешикчелердин өлчөмү жана конкреттүү бетинин аянты бири-бирин толуктап турган эки түшүнүк. Кичинекей тешикчелердин өлчөмү чоң спецификалык беттик аянтты билдирет жана тескерисинче. Чоң спецификалык бет аянты үлгү молекулалары менен байланышкан фазалардын ортосундагы өз ара аракеттенүүнү күчөтөт, кармап калууну күчөтөт, үлгү жүктөө жана мамычанын сыйымдуулугун жогорулатат жана татаал компоненттерди бөлөт. Толугу менен тешиктүү толтургучтар толтургучтардын бул түрүнө кирет. жогорку бөлүү талаптары бар адамдар үчүн, ал чоң өзгөчө бети менен толтургучтарды тандоо сунуш кылынат; кичинекей спецификалык беттик аянт арткы басымды азайтып, мамычанын эффективдүүлүгүн жакшыртат жана градиенттик анализ үчүн ылайыктуу болгон тең салмактуулук убактысын азайтат. Негизги кабык толтургучтары толтургучтардын бул түрүнө кирет. Бөлүнүүнү камсыз кылуу үчүн анализдин эффективдүүлүгүнө талаптары жогору болгондор үчүн өзгөчө бетинин кичинекей аянты бар толтургучтарды тандоо сунушталат. 2.6 Тешиктердин көлөмү жана механикалык күч
Тешикчелердин көлөмү, ошондой эле "тешикчелердин көлөмү" деп аталат, бир бөлүкчөдөгү боштук көлөмүнүн өлчөмүн билдирет. Бул толтургучтун механикалык күчүн жакшы чагылдыра алат. Тешиктүү көлөмү чоң болгон толтургучтардын механикалык бекемдиги кичинекей тешиктүү толтургучтарга караганда бир аз начарыраак. Тешиктердин көлөмү 1,5 мл/гдан аз же барабар болгон толтургучтар көбүнчө HPLC бөлүү үчүн колдонулат, ал эми тешикчелердин көлөмү 1,5 мл/г ашкан толтургучтар негизинен молекулярдык эксклюзивдүү хроматография жана төмөнкү басымдагы хроматография үчүн колдонулат. 2.7 Чектөө чен
Каптоо кошулмалар менен ачык силанол топторунун (мисалы, щелочтук кошулмалар менен силанол топторунун ортосундагы иондук байланыш, ван-дер-Ваальс күчтөрү жана кычкыл кошулмалар менен силанол топторунун ортосундагы суутек байланыштары сыяктуу) өз ара аракеттенүүдөн келип чыккан калдыктардын чокуларын азайтат, ошону менен мамычанын эффективдүүлүгүн жана чоку формасын жакшыртат. . Жапкычсыз байланыштырылган фазалар, өзгөчө полярдык үлгүлөр үчүн, жабылган байланыш фазаларына салыштырмалуу ар кандай тандалмаларды жаратат.
- Ар кандай суюк хроматография колонналарынын колдонуу чөйрөсү
Бул бөлүмдө суюк хроматография колонналарынын ар кандай түрлөрүнүн колдонуу чөйрөсү айрым учурларда сүрөттөлөт.
3.1 Тескери фазалуу C18 хроматографиялык колонна
C18 мамычасы эң көп колдонулган тескери фазалуу тилке болуп саналат, ал көпчүлүк органикалык заттардын мазмунуна жана ыпластык сыноолоруна жооп бере алат жана орто полярдуу, начар полярдуу жана полярдуу эмес заттарга карата колдонулат. C18 хроматографиялык колоннасынын түрү жана спецификациясы атайын бөлүү талаптарына ылайык тандалышы керек. Мисалы, жогорку бөлүү талаптары бар заттар үчүн 5 мкм*4,6 мм*250 мм спецификациялары көбүнчө колдонулат; татаал бөлүү матрицалары жана окшош полярдуулугу бар заттар үчүн 4 мкм*4,6 мм*250 мм спецификациясы же бөлүкчөлөрдүн кичине өлчөмдөрү колдонулушу мүмкүн. Мисалы, автор 3 мкм*4,6 мм*250 мм мамычаны целекоксиб APIдеги эки генотоксик аралашманы аныктоо үчүн колдонгон. Эки заттын бөлүнүшү 2,9га жетиши мүмкүн, бул эң сонун. Мындан тышкары, бөлүүнү камсыз кылуу шартында, тез талдоо талап кылынса, 10 мм же 15 мм кыска мамыча көбүнчө тандалат. Мисалы, автор пиперакин фосфат APIдеги генотоксиктүү аралашманы аныктоо үчүн LC-MS/MS колдонгондо, 3 мкм*2,1 мм*100 мм колонка колдонулган. Булганыч менен негизги компоненттин ортосундагы бөлүнүү 2,0 болгон жана үлгүнү аныктоо 5 мүнөттүн ичинде бүтүшү мүмкүн. 3.2 Тескери фазалуу фенил колонкасы
Фенил колонкасы да тескери фазалуу мамычанын бир түрү болуп саналат. Мамычанын бул түрү ароматтык кошулмалар үчүн күчтүү селективдүүлүккө ээ. Кадимки C18 мамычасы менен өлчөнгөн ароматтык кошулмалардын реакциясы начар болсо, фенил мамычасын алмаштырууну карап көрсөңүз болот. Мисалы, мен celecoxib API жасап жатканда, ошол эле өндүрүүчүнүн фенил мамычасы жана ошол эле спецификация (бардыгы 5 мкм * 4,6 мм * 250 мм) менен өлчөнгөн негизги компоненттик жооп C18 мамычасына караганда 7 эсе көп болгон. 3.3 Нормалдуу фазалык тилке
Тескери фазалуу колоннага эффективдүү кошумча катары нормалдуу фаза тилкеси жогорку полярдуу кошулмалар үчүн ылайыктуу. Эгерде тескери фазалуу колоннадагы 90%дан ашык суулуу фаза менен элюциялоодо чоку дагы эле абдан тез болсо, ал тургай, эриткичтин чокусуна жакын жана аны менен бири-бирине дал келсе, нормалдуу фаза мамычасын алмаштырууну карап көрсөңүз болот. Колонналардын бул түрүнө хилик мамыча, амино мамыча, циано мамыча ж.б.
3.3.1 Хилик мамычасы Хилик колонкасы, адатта, полярдык заттарга жооп кайтарууну күчөтүү үчүн гидрофилдик топторду байланышкан алкил чынжырына киргизет. Колонналардын бул түрү кант заттарын анализдөө үчүн ылайыктуу. Автор ксилоза жана анын туундуларынын мазмунун жана ага тиешелүү заттарды жасоодо колонканын бул түрүн колдонгон. Ксилозанын туундусунун изомерлери да жакшы бөлүнөт;
3.3.2 Амино мамычасы жана циано мамычасы Амино мамычасы жана циано мамычасы, тиешелүүлүгүнө жараша, атайын заттардын тандалмалыгын жакшыртуу үчүн байланышкан алкил чынжырынын аягында амино жана циано модификацияларын киргизүүнү билдирет: мисалы, амино мамыча - бул жакшы тандоо канттарды, аминокислоталарды, негиздерди жана амиддерди бөлүү үчүн; циано колоннасы конъюгацияланган байланыштардын болушуна байланыштуу гидрогенделген жана гидрогенделбеген структуралык окшош заттарды бөлүүдө жакшыраак тандоого ээ. Амино мамыча жана циано мамычасы көбүнчө кадимки фаза тилкеси менен тескери фаза тилкесинин ортосунда которулушу мүмкүн, бирок тез-тез которуу сунушталбайт. 3.4 Хирал тилкеси
Хирал колонкасы, аты айтып тургандай, хиралдык кошулмаларды, айрыкча фармацевтика тармагында бөлүү жана талдоо үчүн ылайыктуу. Кадимки тескери фаза жана нормалдуу фаза мамычалары изомерлердин бөлүнүшүнө жетише албаганда мамычанын бул түрү каралышы мүмкүн. Мисалы, автор 1,2-дифенилэтилендиаминдин эки изомерин: (1S, 2S)-1, 2-дифенилэтилендиамин жана (1R, 2R)-1, 2 бөлүү үчүн 5 мкм*4,6 мм*250 мм хиралдык колонканы колдонгон. -дифенилэтилендиамин жана экөөнүн ортосундагы бөлүнүү болжол менен 2,0 ге жеткен. Бирок, хиралдык мамычалар мамычалардын башка түрлөрүнө караганда кымбатыраак, адатта 1W+/даана. Мындай тилкелерге муктаждык бар болсо, бөлүм жетиштүү бюджетти түзүшү керек. 3.5 Ион алмаштыруучу колонна
Ион алмашуу колонналары заряддалган иондорду, мисалы, иондорду, белокторду, нуклеиндик кислоталарды жана кээ бир кант заттарын бөлүү жана анализдөө үчүн ылайыктуу. Толтургучтун түрү боюнча алар катион алмашуу колонналары, анион алмашуу колонналары жана күчтүү катион алмашуу колонналары болуп бөлүнөт.
Катион алмашуу колонналарына кальцийдин негизиндеги жана суутектүү колонналар кирет, алар негизинен аминокислоталар сыяктуу катиондук заттарды анализдөө үчүн ылайыктуу. Мисалы, автор кальций глюконатын жана кальций ацетатын жууган эритмеде анализдегенде кальций негизиндеги колонкаларды колдонгон. Эки зат тең λ=210нмде күчтүү реакцияларга ээ болгон жана бөлүнүү даражасы 3,0ге жеткен; глюкоза менен байланышкан заттарды талдоодо автор суутек негизиндеги колонкаларды колдонгон. Бир нече негизги тиешелүү заттар – мальтоза, мальтотироза жана фруктоза – дифференциалдык детекторлордо жогорку сезгичтикке ээ болгон, аныктоо чеги 0,5 промилледен төмөн жана 2,0-2,5 бөлүнүү даражасы менен.
Анион алмашуу колонналары, негизинен, органикалык кислоталар жана галоген иондору сыяктуу аниондук заттарды талдоо үчүн ылайыктуу; күчтүү катион алмашуу колонналары жогорку ион алмашуу жөндөмдүүлүгүнө жана селективдүүлүккө ээ жана татаал үлгүлөрдү бөлүү жана талдоо үчүн ылайыктуу.
Жогоруда айтылгандар автордун өз тажрыйбасы менен айкалышкан бир нече жалпы суюк хроматография колонналарынын түрлөрүнө жана колдонуу диапазонуна киришүү. Иш жүзүндө колдонууда хроматографиялык колонналардын башка атайын түрлөрү бар, мисалы, чоң тешиктүү хроматографиялык колонналар, кичинекей тешиктүү хроматографиялык колонналар, жакындык хроматография колонналары, көп режимдүү хроматография колонналары, ультра жогорку натыйжалуу суюк хроматография колонналары (UHPLC), суперкритикалык суюктук хроматография колонналары ( SFC) ж.б. Алар ар кандай тармактарда маанилүү роль ойнойт. Хроматографиялык колонналардын спецификалык түрү үлгүнүн түзүлүшүнө жана касиеттерине, бөлүү талаптарына жана башка максаттарга ылайык тандалышы керек.
Посттун убактысы: 14-июнь-2024